D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
ផ្សិត phytopathogenic Colletotrichum coccodes បង្កឱ្យមានជំងឺគ្រោះថ្នាក់នៃដំឡូងនិងប៉េងប៉ោះដែលត្រូវបានគេស្គាល់ថាជា anthracnose និងចំណុចខ្មៅមើម។ ដោយផ្អែកលើលក្ខណៈ morphological, ពួកគេជាញឹកញាប់ពិបាកក្នុងការបែងចែកពីជំងឺដែលបណ្តាលមកពី microorganisms ផ្សេងទៀត; នៅលើផ្លែឈើប៉េងប៉ោះពណ៌បៃតង ជំងឺនេះអាចជារោគសញ្ញាដែលលេចឡើងតែលើផ្លែឈើក្រហមទុំប៉ុណ្ណោះ។ សម្រាប់ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យរហ័ស និងត្រឹមត្រូវនៃមេរោគនោះ ប្រព័ន្ធតេស្ត PCR ពេលវេលាពិតត្រូវបានផ្តល់ជូន។ ដើម្បីបង្កើតប្រព័ន្ធសាកល្បង លំដាប់នុយក្លេអូទីតនៃហ្សែន glycerol triphosphate dehydrogenase ត្រូវបានកំណត់សម្រាប់ 45 ពូជនៃ C. coccodes ដាច់ដោយឡែកពីមើមដំឡូងនៅក្នុងតំបន់ផ្សេងៗគ្នានៃប្រទេសរុស្ស៊ី។
ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលដែលទទួលបាន និងការវិភាគនៃលំដាប់ស្រដៀងគ្នានៃប្រភេទសត្វផ្សេងទៀតដែលមាននៅក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យ GenBank ការ primers ជាក់លាក់នៃប្រភេទសត្វ និងការស៊ើបអង្កេតមួយត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ C. coccodes ។ ដើម្បីពិនិត្យមើលភាពជាក់លាក់នៃប្រព័ន្ធតេស្តដែលបានបង្កើត PCR ត្រូវបានអនុវត្តជាមួយ DNA ដែលដាច់ឆ្ងាយពីវប្បធម៌សុទ្ធនៃពពួកប៉ារ៉ាស៊ីត និងផ្សិត saprotrophic ចំនួន 15 ប្រភេទដែលទាក់ទងនឹងរុក្ខជាតិប៉េងប៉ោះ និងដំឡូង (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani , Colletotrichum coccodes, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides)។ វត្តមានរបស់ Colletotrichum coccodes DNA ត្រូវបានរកឃើញនៅវដ្តនៃកម្រិត 20-27 ខណៈពេលដែលប្រភេទសត្វផ្សេងទៀតត្រូវបានរកឃើញបន្ទាប់ពី 40 វដ្ត ឬមិនត្រូវបានរកឃើញ។ ប្រព័ន្ធតេស្តអនុញ្ញាតឱ្យអ្នកអាចរកឃើញ C. coccodes DNA កំហាប់លើសពី 0.01 ng/mm3 នៅក្នុងល្បាយ PCR ដែលបានវិភាគ។ ដោយប្រើប្រព័ន្ធសាកល្បងដែលបានអភិវឌ្ឍ វត្តមានរបស់ C. coccodes ត្រូវបានស៊ើបអង្កេតនៅក្នុងស្លឹកប៉េងប៉ោះដែលមានរោគសញ្ញានៃជំងឺផ្សិត និងនៅក្នុងមើមដំឡូងដោយគ្មានរោគសញ្ញាខាងក្រៅនៃជំងឺ។ ស្លឹកដែលមានរោគសញ្ញានៃការឆ្លងមេរោគផ្សិតត្រូវបានប្រមូលពីវាលពីរផ្សេងគ្នានៅក្នុងតំបន់ Krasnodar គឺមើម - ពីវាលនៅក្នុងតំបន់ Kostroma, Moscow, Kaluga និង Nizhny Novgorod ។ នៅតំបន់ Krasnodar ស្លឹកប៉េងប៉ោះមួយមានផ្ទុក C. coccodes DNA ត្រូវបានរកឃើញ។ វត្តមានដ៏គួរឱ្យទុកចិត្តនៃ DNA នៃមេរោគនេះត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងគំរូចំនួន 5 នៃមើមដែលដាំដុះនៅក្នុងតំបន់ Kostroma, Moscow និង Kaluga ។
សេចក្តីណែនាំ
ផ្សិតនៃប្រភេទ Colletotrichum គឺជាសារធាតុបង្កជំងឺដ៏គ្រោះថ្នាក់ដែលវាយប្រហារគ្រាប់ធញ្ញជាតិ បន្លែ ឱសថ និងផ្លែឈើដែលមានអាយុច្រើនឆ្នាំ និងរុក្ខជាតិបឺរី។ មួយនៃប្រភេទសត្វពាហនៈនៃប្រភេទនេះ Colletotrichum coccodes (Wallr) ។
Hughes គឺជាភ្នាក់ងារមូលហេតុនៃ anthracnose និងចំណុចខ្មៅនៃដំឡូង និងប៉េងប៉ោះ និងបណ្តាលឱ្យមានជំងឺនៃរុក្ខជាតិមួយចំនួនផ្សេងទៀតនៃក្រុម nightshade រួមទាំង។ ស្មៅ (Dillard, 1992) ។ C. coccodes ឆ្លងគ្រប់ផ្នែកក្រោមដីនៃរុក្ខជាតិ គល់ដើម ស្លឹក និងផ្លែឈើ (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994)។ នៅលើស្បែកនៃមើមដំឡូងដែលមានមេរោគ ការវិវត្តនៃចំណុចប្រផេះជាមួយនឹងគែមដែលបានកំណត់យ៉ាងច្បាស់លាស់ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញ ដែលចំណុចខ្មៅនៃ sporulation និង microsclerotia អាចមើលឃើញយ៉ាងច្បាស់។ កំឡុងពេលផ្ទុក ដំបៅដែលមានសារធាតុទន់អាចបង្កើតនៅក្នុងមើមមើម ពោលគឺឧ។ ជំងឺនេះឈានដល់ដំណាក់កាល anthracnose ដែលកម្រមានណាស់។
ក្នុងពេលជាមួយគ្នានេះ រោគសញ្ញានៃជំងឺ anthracnose (ដំបៅដែលគ្របដណ្ដប់លើស្បែកដែលមានចំណុចខ្មៅតូចៗ) មានលក្ខណៈធម្មតានៅលើផ្លែប៉េងប៉ោះ។ នៅលើស្លឹក រោគសញ្ញានៃដំបៅ C. coccodes លេចឡើងជាចំណុចពណ៌ត្នោតខ្មៅ ដែលជាធម្មតាមានព្រំប្រទល់ដោយជាលិកាពណ៌លឿង (Johnson, 1994)។
ការវិវឌ្ឍន៍នៃចំណុចខ្មៅនៅលើមើមធ្វើឱ្យខូចរូបរាងរបស់វា ដែលជាពិសេសនៅពេលលក់ដំឡូងបារាំងដែលលាងរួច។ ការបំបែកសំបកនាំឱ្យមានការហួតច្រើន និងការខាតបង់ការផ្ទុកកើនឡើង (Hunger and McIntyre, 1979)។ ការខូចខាតដល់សរីរាង្គរុក្ខជាតិផ្សេងទៀតនាំទៅរកការបាត់បង់ទិន្នផល ដែលត្រូវបានកត់សម្គាល់ទាំងនៅក្នុងលក្ខខណ្ឌដីបើកចំហ និងដីបិទ (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999)។ ជំងឺដែលបង្កឡើងដោយ C. coccodes គឺជារឿងធម្មតានៅក្នុងតំបន់ដែលផលិតដំឡូងស្ទើរតែទាំងអស់នៃពិភពលោក រួមទាំងប្រទេសរុស្ស៊ី (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018)។ ការគ្រប់គ្រងជំងឺទាំងនេះមានការពិបាកដោយសារតែប្រសិទ្ធភាពមិនគ្រប់គ្រាន់នៃថ្នាំសម្លាប់ផ្សិតដែលមានស្រាប់ប្រឆាំងនឹង C. coccodes និងកង្វះពូជដែលធន់ទ្រាំ (អាន និងលាក់, 1995) ។
សារធាតុ inoculum នៃ C. coccodes អាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅក្នុងមើមគ្រាប់ពូជ (អាន និងលាក់, 1988; Johnson et al., 1997), គ្រាប់ពូជប៉េងប៉ោះ (Ben-Daniel et al., 2010) ហើយអាចរស់បានក្នុងរយៈពេលយូរនៅក្នុងដី និង នៅលើកំទេចកំទីរុក្ខជាតិ (Dillard, 1990; Dillard, Cobb, 1993) និងនៅក្នុងស្មៅ (Raid, Pennypacker, 1987)។ ស្នាដៃរបស់អ្នកនិពន្ធមួយចំនួន (Read, Hide, 1988; Barkdoll, Davis, 1992; Johnson et al., 1997; Dillard, Cobb, 1993) បានបង្ហាញថាការវិវត្តនៃជំងឺនៅលើដំឡូងបារាំង និងប៉េងប៉ោះភាគច្រើនអាស្រ័យទៅលើវត្តមាន។ នៃ inoculum នៅក្នុងសម្ភារៈគ្រាប់ពូជនិងនៅក្នុងដី។ ដូច្នេះ ដើម្បីកាត់បន្ថយការខាតបង់ពីជំងឺនេះ ចាំបាច់ត្រូវធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ (រាប់បញ្ចូលទាំងបរិមាណ) ការផ្សព្វផ្សាយផ្សិតនៅក្នុងសម្ភារៈគ្រាប់ពូជ ក្នុងដី ក្នុងមើមគ្រាប់ពូជដំឡូង និងគ្រាប់ពូជប៉េងប៉ោះដែលទុកសម្រាប់រក្សាទុក។ ការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ morphological នៅក្នុងដីនិងសម្ភារៈរុក្ខជាតិអាចត្រូវបានអនុវត្តតែដោយវត្តមាននៃ microsclerotia ដែលទោះជាយ៉ាងណាក៏ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងប្រភេទផ្សេងទៀតនៃផ្សិត។
រោគសញ្ញានៅលើមើមគឺស្រដៀងទៅនឹងស្នាមប្រាក់ ដែលបង្កឡើងដោយផ្សិត Helminthosporium solani ។ ការបែងចែក Colletotrichum coccodes និង Helminthosporium solani ទៅជាវប្បធម៌សុទ្ធគឺពិតជាពិបាក និងចំណាយពេលយូរដោយសារតែការលូតលាស់យឺតនៅលើឧបករណ៍ផ្ទុកសារធាតុចិញ្ចឹម។ ដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណ Colletotrichum coccodes យ៉ាងឆាប់រហ័ស វាចាំបាច់ក្នុងការប្រើវិធីសាស្ត្រវិនិច្ឆ័យឧបករណ៍។ វិធីសាស្រ្តងាយស្រួលបំផុតគឺប្រតិកម្មខ្សែសង្វាក់ polymerase (PCR) និងការកែប្រែរបស់វា - PCR ពេលវេលាពិត។ បច្ចុប្បន្ននេះ នៅអឺរ៉ុប និងសហរដ្ឋអាមេរិក ប្រព័ន្ធសាកល្បងដែលបង្កើតឡើងដោយអ្នកស្រាវជ្រាវអង់គ្លេស (Cullen et al., 2002) សម្រាប់តំបន់ ITS1 នៃ rDNA ត្រូវបានប្រើ។ ការប្រើប្រាស់របស់វាក៏បានបង្ហាញពីលទ្ធផលល្អនៅក្នុងការវិភាគនៃភាពឯកោរបស់រុស្ស៊ី (Belov et al, 2018) ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ C. coccodes មានភាពប្រែប្រួលខ្ពស់ ហើយការរកឃើញរបស់វាដោយប្រើលំដាប់ DNA តែមួយអាចនាំទៅរកលទ្ធផលអវិជ្ជមានមិនពិត។ សម្រាប់ភាពជឿជាក់នៃការធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យកាន់តែខ្លាំង ការវិភាគលើលំដាប់ DNA ជាក់លាក់នៃប្រភេទសត្វជាច្រើនគឺត្រូវបានទាមទារ ដូច្នេះហើយយើងបានបង្កើតប្រព័ន្ធសាកល្បងដើមដែលអនុញ្ញាតឱ្យយើងកំណត់អត្តសញ្ញាណ C. coccodes តាមលំដាប់នៃហ្សែន glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ។
សំភារៈនិងវិធីសាស្រ្ត
ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាព និងភាពជាក់លាក់នៃប្រព័ន្ធសាកល្បងដែលបានបង្កើត វប្បធម៌សុទ្ធនៃផ្សិត 15 ប្រភេទដែលដាច់ដោយអ្នកនិពន្ធពីគំរូដែលរងផលប៉ះពាល់នៃស្លឹកប៉េងប៉ោះ និងផ្លែឈើ និងមើមដំឡូងត្រូវបានគេប្រើ (តារាងទី 1) ។ សម្រាប់ភាពឯកោសរីរាង្គរុក្ខជាតិដែលមានរោគសញ្ញានៃការឆ្លងមេរោគផ្សិតត្រូវបានគេយកមិនលើសពីមួយសរីរាង្គក្នុងមួយព្រៃ។
ផ្នែកមួយនៃមើមដែលមានសំបក ចំណិតផ្លែប៉េងប៉ោះ ឬស្លឹកដែលរងផលប៉ះពាល់ត្រូវបានដាក់នៅក្រោមមីក្រូទស្សន៍កែវយឹត បន្ទាប់មក mycelium, spores ឬបំណែកនៃជាលិកាត្រូវបានផ្ទេរទៅឧបករណ៍ផ្ទុក agar (wort agar) នៅក្នុងចាន Petri ជាមួយនឹងម្ជុលកាត់យ៉ាងមុតស្រួច។ ភាពឯកោត្រូវបានរក្សាទុកនៅលើ agar slants នៅក្នុងបំពង់សាកល្បងនៅ 4 ° C ។
គំរូនៃស្លឹកប៉េងប៉ោះដែលមានបំណងសម្រាប់ការវិភាគជាមួយនឹងរោគសញ្ញានៃជំងឺផ្សិតភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការប្រមូល (នៅក្នុងវាល) ត្រូវបានគេដាក់ក្នុងជាតិអាល់កុលអេទីល 70% ដែលពួកវាត្រូវបានរក្សាទុករហូតដល់ការទាញយក DNA ។ មើមដំឡូងត្រូវបានបញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍ បកសំបក (ដុំ 2×1 សង់ទីម៉ែត្រ) និងកកនៅ -20°C។ ពួកគេត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទឹកកករហូតដល់ការទាញយក DNA ។
វប្បធម៌សុទ្ធនៃផ្សិតសម្រាប់ការទាញយក DNA ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកសណ្តែករាវ។ mycelium ផ្សិតត្រូវបានយកចេញពីឧបករណ៍ផ្ទុករាវ, ស្ងួតនៅលើក្រដាសតម្រង, កកក្នុងអាសូតរាវ, ធ្វើឱ្យដូចគ្នា, incubated នៅក្នុង CTAB buffer, បន្សុតជាមួយ chloroform, precipitated ជាមួយល្បាយនៃ isopropanol និង 0.5 M ប៉ូតាស្យូម acetate និងលាងពីរដងជាមួយនឹងជាតិអាល់កុល 2% ។ . DNA លទ្ធផលត្រូវបានរំលាយនៅក្នុងទឹក deionized និងរក្សាទុកនៅ -70 ° C (Kutuzova et al., 20) ។ ការផ្តោតអារម្មណ៍ DNA ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍កំណត់បរិមាណ HS DNA សម្រាប់ DNA ពីរខ្សែនៅលើ Qubit 2017 (Qiagen ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់)។ សំណាកសំណាកដែលត្រូវបានរក្សាទុក និងកកត្រូវបានដីនៅក្នុងអាសូតរាវ បន្ទាប់មក DNA ត្រូវបានញែកដាច់ពីគេដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងលើ (សម្រាប់ mycelium នៃវប្បធម៌ផ្សិតសុទ្ធ)។
តារាងទី 1. ប្រភពដើមនៃពូជផ្សិតដែលប្រើក្នុងការងារនេះ។
ឈ្មោះផ្សិត | រុក្ខជាតិ, សរីរាង្គ | កន្លែងជ្រើសរើស |
---|---|---|
Colletotrichum coccodes 1, C. coccodes 2, C. coccodes 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | មើមដំឡូង | តំបន់ Kostroma មើមដំឡូងនៃជំនាន់ទី 1 ពូជក្រហម Scarlett |
Colletotrichum coccodes ៤ | ស្លឹកដំឡូង | តំណាង Mari El, Yoshkar-Ola |
Helminthosporium solani | មើមដំឡូង | តំបន់ Magadan, pos ។ តង់, មើមដំឡូង |
Cladosporium fulvum | ស្លឹកប៉េងប៉ោះ | តំបន់មូស្គូ ប៉េងប៉ោះមានផ្លែធំ |
Alternaria tomatophila | ផ្លែប៉េងប៉ោះ | ផ្ទេរដោយនិយោជិតនៃមន្ទីរពិសោធន៍ mycology និង phytopathology នៃវិទ្យាស្ថានស្រាវជ្រាវ All-Russian នៃការការពាររុក្ខជាតិ |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp ។ | ផ្លែប៉េងប៉ោះ | តំបន់ Krasnodar ស្រុក Crimean ពូជ Slivka |
ហ្វ័រម៉ារីនស៊ីដ្យូម | ឫសស្រូវសាលី | តំបន់មូស្គូ |
PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ amplifier DTprime (DNA-Technology) ។ ដើម្បីអនុវត្ត PCR យើងបានប្រើ primers ដើម និងការស៊ើបអង្កេតសម្រាប់តំបន់ជាក់លាក់នៃប្រភេទសត្វនៃ glycerol triphosphate dehydrogenase gene: forward primer Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCACGCA, reverse primer Coc280gdr – TACTTGAGCATGTAGGCCTGATGGA, probe (c-GATFTA) - GGGCTGCTGCCG(ទំ)។ ថ្នាំ primers ពង្រីកតំបន់ 1 bp ។
ប្រតិកម្មពាក់ព័ន្ធនឹង 50 ng នៃ DNA សរុប (នៅពេលវិភាគស្លឹក និងមើម) និង 10 ng (នៅពេលវិភាគ DNA ពីវប្បធម៌ផ្សិតសុទ្ធ) ។ ល្បាយប្រតិកម្ម (35 μl) ត្រូវបានបែងចែកជាពីរផ្នែកដោយស្រទាប់ប៉ារ៉ាហ្វីន: ផ្នែកខាងក្រោម (20 μl) មានផ្ទុក 2 μlនៃ 10 × សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម (750 mM Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH4) 2SO4; 25 mM MgCl2; 0.1% Tween- 20), 0.5 mM នីមួយៗ deoxynucleotide triphosphate, 7 pmol primer នីមួយៗ និង 4 pmol hydrolyzable fluorescent probe; កំពូលមានផ្ទុក 1 μlនៃ 10 × PCR buffer និង 1 ឯកតានៃ Taq polymerase ។
ការបំបែកល្បាយជាមួយប្រេងប៉ារាហ្វីនអនុញ្ញាតឱ្យបំពង់ត្រូវបានរក្សាទុករយៈពេលយូរនៅសីតុណ្ហភាព 5 ° C និងដើម្បីធានាបាននូវការចាប់ផ្តើមក្តៅនៃ PCR បន្ទាប់ពីពួកគេត្រូវបានកំដៅរយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពលើសពី 80 ° C ។ PCR ត្រូវបានអនុវត្តតាមកម្មវិធីដូចខាងក្រោម: 94.0 ° C - 90 s (1 វដ្ត); 94.0 ° C - 30 វិ; 64.0 ° C - 15 s (5 វដ្ត); 94.0 ° C - 10 វិ; 64.0 ° C - 15 s (45 វដ្ត); 10.0 ° C - ការផ្ទុក។
លទ្ធផលនិងការពីភាក្សា
លំដាប់នៃហ្សែន glycerol triphosphate dehydrogenase ត្រូវបានកំណត់ក្នុង 45 ពូជដែលដាច់ចេញពីស្លឹក ដើម មើមដំឡូង និងផ្លែប៉េងប៉ោះ (Kutuzova, 2018) នៅក្នុងតំបន់ផ្សេងៗគ្នានៃប្រទេសរុស្ស៊ី។ លំដាប់ដែលបានសិក្សានៃប្រភេទទាំងអស់ត្រូវបានបែងចែកទៅជា 2 ក្រុម ដោយខុសគ្នានៅក្នុង nucleotides ពីរ។ លំដាប់នុយក្លេអូទីតរបស់អ្នកតំណាងនៃក្រុមទាំងពីរត្រូវបានដាក់ក្នុង GenBank ក្រោមលេខ KY496634 និង KY496635។
primers coc70gdf, coc280gdr និង cocgdz probe ដែលត្រូវបានសាងសង់នៅលើមូលដ្ឋានរបស់វាត្រូវបានត្រួតពិនិត្យដោយប្រើកម្មវិធី BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) នៅលើគ្រប់លំដាប់ហ្សែន glycerol triphosphate dehydrogenase ដែលមាននៅក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យ GenBank ពីប្រភេទពពួក Colletotrichum និងសារពាង្គកាយផ្សេងទៀត។
គ្មានតំបន់ DNA នៃសារពាង្គកាយផ្សេងទៀតដែលមានលក្ខណៈដូចគ្នាខ្លាំងទៅនឹង primers និងការស៊ើបអង្កេតត្រូវបានរកឃើញទេ។
ភាពរសើបនៃប្រព័ន្ធតេស្តត្រូវបានសាកល្បងដោយប្រើសំណាកដែលមានកំហាប់ផ្សេងៗគ្នានៃ C. coccodes DNA, DNA ពីស្លឹកដំឡូងដែលរងផលប៉ះពាល់ដោយជំងឺ anthracnose (ប្រមូលនៅឆ្នាំ 2017 នៅ Mari El, Red Scarlett) និងសំបកមើមដែលរងផលប៉ះពាល់ដោយចំណុចខ្មៅ (ប្រមូលបាននៅក្នុង តំបន់ Kostroma ពូជក្រហម Scarlett តារាងទី 2) ។ ដើម្បីបញ្ជាក់ពីវត្តមាន DNA នៅក្នុងមើមដំឡូង និងស្លឹក ពូជ C. coccodes ត្រូវបានញែកចេញពីពួកវាទៅជាវប្បធម៌សុទ្ធ។
លទ្ធផលនៃការវិភាគភាពរសើបនៃប្រព័ន្ធតេស្តបង្ហាញថាវាអាចត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដោយជោគជ័យនូវវត្តមានរបស់ C. coccodes DNA នៅក្នុងគំរូមួយ ប្រសិនបើមាតិកាសរុបរបស់វានៅក្នុងល្បាយ PCR គឺច្រើនជាង 0.05 ng ។ នេះគឺគ្រប់គ្រាន់ណាស់សម្រាប់ការរកឃើញព្រោះ sclerotia មួយមានជាមធ្យម 0.131 ng និងមួយ spore - ប្រហែល 0.04 ng នៃ DNA (Cullen et al., 2002) ។ ប្រព័ន្ធតេស្តដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយក្រុមភាសាអង់គ្លេស (Cullen et al., 2002) បានបង្ហាញពីភាពប្រែប្រួលស្រដៀងគ្នា (ដំណាក់កាលទី 34 នៅ 0.05 ng នៃ DNA និង 37 នៅ 0.005 ng) ។
ការវិភាគលើសំណាកធម្មជាតិដែលមាន C. coccodes ក្នុងគ្រប់ករណីទាំងអស់បានធ្វើឱ្យវាអាចរកឃើញវត្តមានរបស់វានៅក្នុងគំរូ (តារាងទី 2) យ៉ាងជឿជាក់។ វិធីសាស្រ្តដែលបានស្នើឡើងសម្រាប់ការទាញយក DNA ក៏ប្រែទៅជាអាចអនុវត្តបានសម្រាប់ការវិភាគគំរូរុក្ខជាតិធម្មជាតិ។
តារាងទី 2. ការកំណត់ភាពប្រែប្រួលនៃប្រព័ន្ធតេស្តកំណត់អត្តសញ្ញាណ Colletotrichum coccodes ដែលបានស្នើឡើងសម្រាប់ PCR ពេលវេលាជាក់ស្តែង
ចុះឈ្មោះ | បរិមាណ DNA ក្នុងគំរូ*, ng | វដ្តកម្រិត | ការរកឃើញ C. coccodes |
---|---|---|---|
Mycelium នៃ Colletotrichum coccodes | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
សំបកមើម ១ | 50 | 32 | + |
សំបកមើម ១ | 50 | 30 | + |
សំបកមើម ១ | 50 | 31.5 | + |
ស្លឹកដំឡូង | 50 | 29.5 | + |
ចំណាំ។ * នៅក្នុងល្បាយនៃផលិតផល PCR ។
ភាពជាក់លាក់នៃប្រព័ន្ធតេស្តត្រូវបានធ្វើតេស្តលើសំណាក DNA ដែលស្រង់ចេញពីផ្សិតចំនួន 15 ប្រភេទ។ ពូជផ្សិតទាំងអស់ត្រូវបានបំបែកដោយអ្នកនិពន្ធពីផ្លែឈើ និងស្លឹកប៉េងប៉ោះដែលរងផលប៉ះពាល់ និងមានសុខភាពល្អ និងមើមដំឡូង។ ពូជមួយត្រូវបានញែកចេញពីឫសស្រូវសាលី (តារាងទី 1) ។ ក្នុងចំណោមផ្លែឈើទាំងនោះដែលដាច់ឆ្ងាយពីផ្ទៃផ្លែឈើក៏មានប្រភេទសត្វដែលមិនបង្កជំងឺសម្រាប់ប៉េងប៉ោះដែរ (ឧទាហរណ៍ Phellinus ferrugineovelutinus)។
ការសិក្សាបានបង្ហាញថា C. coccodes DNA ត្រូវបានរកឃើញនៅវដ្តកម្រិតនៃ 20–27 ខណៈពេលដែលប្រភេទផ្សិតផ្សេងទៀតមិនត្រូវបានរកឃើញ ឬផ្តល់សញ្ញាបន្ទាប់ពីវដ្តទី 40 ដែលអាចត្រូវបានកំណត់គុណលក្ខណៈដោយឥទ្ធិពលសំឡេងមិនជាក់លាក់ (តារាងទី 3)។
តារាងទី 3. ការធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធសាកល្បងលើប្រភេទផ្សេងៗនៃផ្សិត
ឈ្មោះផ្សិត | វដ្តកម្រិត |
កូឡាជូស្តុម coccodes 1 | 20.9 |
គ 2 | 22.6 |
គ 3 | 23 |
គ 4 | 22 |
ហ្វ័រម៉ារីនស៊ីដ្យូម | > 40 |
F. verticillium | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
ដំណាក់កាល Phomopsis | > 40 |
Alternaria ជម្មើសជំនួស | > 40 |
A. tomatophila | > 40 |
Helminthosporium solani | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporium cladosporioides | > 40 |
C. fulvum | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
Penicillium sp ។ | > 40 |
ចំណាំ។ * បរិមាណ DNA ក្នុងសំណាកទាំងអស់គឺ 10 ng ។
ប្រព័ន្ធសាកល្បងដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណ C. coccodes នៅក្នុងគំរូស្លឹកប៉េងប៉ោះដែលមានរោគសញ្ញានៃការខូចខាតដោយភ្នាក់ងារបង្ករោគ necrotrophic និងមើមដំឡូងគ្រាប់ពូជដោយគ្មានរោគសញ្ញាដែលអាចមើលឃើញ។ សម្រាប់ការសិក្សា មើមគ្រាប់ពូជនៃពូជផ្សេងៗគ្នាដែលដាំដុះនៅតំបន់ Kostroma, Moscow, Kaluga និង Nizhny Novgorod ត្រូវបានគេយក។ វត្តមានរបស់ C. coccodes DNA ត្រូវបានចាត់ទុកថាអាចទុកចិត្តបាននៅក្នុងគំរូដែលវដ្តកម្រិតចាប់ផ្ដើមមិនលើសពី 35 ។ តម្លៃកម្រិតនេះត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើការរកឃើញដែលអាចទុកចិត្តបាននៃ 0.05 ng នៃ C. coccodes DNA (វដ្តកម្រិត 33.5 តារាងទី 2) និង ការពិតដែលថានៅពេលដែលនៅកម្រិតចាប់ផ្តើមវដ្តលើសពី 40, DNA មិនជាក់លាក់នៃប្រភេទផ្សិតផ្សេងទៀតត្រូវបានគេធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យ។ ជាមួយនឹងវិធីសាស្រ្តនេះ វត្តមានដែលអាចទុកចិត្តបាននៃ C. coccodes DNA ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងគំរូចំនួន 5 នៃមើមដែលដាំដុះនៅក្នុងតំបន់ Kostroma, Moscow, Kaluga និងក្នុងស្លឹកប៉េងប៉ោះមួយពីស្រុក Yeisk នៃដែនដី Krasnodar (តារាង 4, 5) ។
តារាងទី 4. ការរកឃើញ coccodes Colletotrichum នៅលើមើមដំឡូង*
លេខគំរូ | ពូជដំឡូង | កន្លែងលូតលាស់ | ការរកឃើញ C. coccodes | វដ្តកម្រិត |
---|---|---|---|---|
1 | ក្រហម Scarlet | តំបន់ Kostroma | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | សាន់តេ | តំបន់មូស្គូ | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky មុនកាលកំណត់ | តំបន់មូស្គូ | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | ម៉ូលី | តំបន់ Kaluga | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | រវើរវាយ | តំបន់ Kaluga | - | |
15 | ហ្គាឡា | តំបន់ Nizhny Novgorod ។ | - | |
16 | - |
ចំណាំ។ * បរិមាណ DNA ក្នុងសំណាកទាំងអស់គឺ 50 ng ។
តារាងទី 5. ការរកឃើញ coccodes Colletotrichum នៅលើស្លឹកប៉េងប៉ោះ*
លេខគំរូ | កន្លែងលូតលាស់ | ការរកឃើញ C. coccodes | វដ្តកម្រិត |
---|---|---|---|
1 | តំបន់ Krasnodar ស្រុក Crimea | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | តំបន់ Krasnodar ស្រុក Yeisk | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* បរិមាណ DNA ក្នុងសំណាកទាំងអស់គឺ 50 ng ។
ប្រព័ន្ធសាកល្បងដែលយើងបានបង្កើតគឺមិនទាបជាងអ្វីដែលបង្កើតឡើងដោយអ្នកស្រាវជ្រាវភាសាអង់គ្លេស (Cullen et al., 2002) ក្នុងភាពរសើប និងភាពជាក់លាក់ និងសមរម្យសម្រាប់ការវិភាគគំរូរុក្ខជាតិ។ ការប្រើប្រាស់របស់វាសម្រាប់ការវិភាគនៃមើមគ្រាប់ពូជបានធ្វើឱ្យវាអាចរកឃើញ C. coccodes DNA នៅក្នុងមើមដោយគ្មានសញ្ញាខាងក្រៅនៃការខូចខាតនិងដើម្បីវិភាគដោយជោគជ័យនៃការឆ្លងនៃស្លឹក។
នៅប្រទេសរុស្ស៊ីរហូតមកដល់បច្ចុប្បន្នមើមដំឡូងមិនត្រូវបានវិភាគសម្រាប់ការឆ្លងមេរោគ C. coccodes ។ ការសិក្សាដំបូងរបស់យើងបានបង្ហាញថាក្នុងចំណោមមើមគ្រាប់ពូជដែលបានសាកល្បងចំនួន 16 ដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងតំបន់ផ្សេងៗគ្នានៃសហព័ន្ធរុស្ស៊ី 5 មាន C. coccodes ។ នេះបង្ហាញថាចំណុចខ្មៅនៃមើមដំឡូងគឺជាជំងឺដំឡូងទូទៅនៅក្នុងប្រទេសរុស្ស៊ី ហើយតួនាទីរបស់វាក្នុងការកាត់បន្ថយបរិមាណ និងគុណភាពនៃដំណាំដំឡូងត្រូវបានគេប៉ាន់ស្មានមិនដល់។
នៅពេលវិភាគស្លឹកប៉េងប៉ោះ វត្តមានដ៏គួរឱ្យទុកចិត្តនៃ C. coccodes DNA ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងស្លឹកមួយពីស្រុក Yeisk នៃដែនដី Krasnodar ។ កាលពីមុន ពេលពិនិត្យមើលចម្ការប៉េងប៉ោះនៅភាគខាងត្បូងនៃប្រទេសរុស្ស៊ីដោយប្រើប្រព័ន្ធសាកល្បងរបស់អង់គ្លេស (Cullen et al., 2002) ស្លឹកដែលមានផ្ទុក C. coccodes ត្រូវបានគេរកឃើញ ហើយនៅក្នុងវាលខ្លះសមាមាត្រខ្ពស់នៃស្លឹកដែលរងផលប៉ះពាល់ដោយ C. coccodes ត្រូវបានរកឃើញ (Belov et al ។ , 2018) ។ នៅក្នុងទឹកដី Krasnodar និង Primorsky និងតំបន់មូស្គូ យើងបានរកឃើញផ្លែប៉េងប៉ោះ ដែលយើងអាចញែកវប្បធម៌សុទ្ធរបស់ C. coccodes ។ វាអាចទៅរួចដែលថា C. coccodes មានការរីករាលដាលច្រើននៅលើប៉េងប៉ោះនៅក្នុងប្រទេសរុស្ស៊ីជាងការជឿនាពេលបច្ចុប្បន្ន ហើយគ្រោះថ្នាក់របស់វាក៏ត្រូវបានគេប៉ាន់ស្មានមិនដល់ផងដែរ។
ដូច្នេះហើយ រហូតមកដល់សព្វថ្ងៃនេះ ពត៌មានគ្រប់គ្រាន់បានប្រមូលផ្តុំលើការចែកចាយយ៉ាងទូលំទូលាយនៃ C. coccodes លើដំឡូងបារាំង និងប៉េងប៉ោះ។
ដើម្បីយល់កាន់តែច្បាស់អំពីតួនាទីរបស់ផ្សិតនេះក្នុងការអភិវឌ្ឍជំងឺដំឡូង និងប៉េងប៉ោះ ការត្រួតពិនិត្យយ៉ាងទូលំទូលាយនៃអត្រាប្រេវ៉ាឡង់របស់វានៅក្នុងប្រទេសរុស្ស៊ី ការសិក្សាអំពីតួនាទីនៃការឆ្លងមេរោគលើដី និងគ្រាប់ពូជ និងតួនាទីនៃចំណុចខ្មៅក្នុងការបាត់បង់ការផ្ទុកគឺចាំបាច់។ ការប្រើប្រាស់ការវិនិច្ឆ័យ PCR អាចជួយសម្រួលការងារនេះបានយ៉ាងសំខាន់ ហើយការប្រើប្រាស់ដំណាលគ្នានៃប្រព័ន្ធសាកល្បងទាំងពីរនឹងបង្កើនភាពត្រឹមត្រូវនៃការវិភាគយ៉ាងខ្លាំង។
ការងារនេះត្រូវបានគាំទ្រដោយមូលនិធិវិទ្យាសាស្ត្ររុស្ស៊ីលេខ 18-76-00009 ។
អត្ថបទនេះត្រូវបានបោះពុម្ពនៅក្នុងទិនានុប្បវត្តិ “Mycology and Phytopathology” (Vol. 54, No. 1, 2020)។